①加胎牛血清培養基：  

動物細胞離體培養常常需要血清。各種細胞合成培養基（如MEM、RPMll640、DMEM）只提供細胞生長所需的各種基礎營養物質，包括碳水化合物、氨基酸、無機鹽、維生素等。血清提供生長必需因子，如激素、微量元素、礦物質和脂肪。根據不同細胞的需求，一般含有10%～20%的血清培養基即可維持細胞較快的生長增殖速度。  

②無菌環境：  

無毒和無菌是體外培養細胞的首要條件。使用的各種試劑和耗材要經過高壓或紫外線滅菌。嚴格的無菌操作是養好細胞的必要前提。為防止細胞受到微生物感染，可在培養基中加入雙抗。  

③溫度和氣體環境：  

一般動物細胞在體外培養的適宜溫度是37℃，不適宜的環境溫度會影響細胞的生長甚至死亡。二氧化碳和氧氣的比例要在細胞培養過程中不斷進行調節，一般維持在5%。二氧化碳既是細胞的代謝產物，又與維持培養液的pH密切相關。  

如何防控污染：保持良好的操作習慣，超凈臺要紫外滅菌30min，以70%的乙醇擦拭無菌操作臺，開啟超凈臺風扇運轉數分鐘后，才開始實驗。  

每次只處理一種細胞，以免失誤混淆或細胞間污染，操作不要觸碰吸管尖頭部或容器口等。  

像對待孩子一樣養細胞，它很脆弱，最好每天關注一下，以免出現培養箱缺二氧化碳，停電、溫度不夠等現象。  

避免全軍覆沒，好細胞要及時保存，有備用的細胞，這樣即使有細胞污染還可以有備用的細胞頂上，不至于太惱火，好習慣要保持。  

不同細胞喜好不同，需要在培養中慢慢體會，例如平滑肌細胞比較好長，2-3天可能就會有很多細胞，應該算是比較好養活的；內皮細胞分泌物較多，需要時不時換洗才會長的好等等。