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PAXgene Blood RNA Kit

用于從PAXgene Blood RNA Tubes中穩定的血液中分離和純化細胞內RNA

• 用于體外診斷，使用PAXgene Blood RNA Tubes
• 用于收集，穩定和凈化的集成系統
• RNA穩定在18-25°C下長達3天
• 在-20°C或-70°C下穩定至少60個月
• 分析前的標準化樣品處理

      PAXgene Blood RNA系統由用于血液收集，穩定和轉運的PAXgene Blood RNA Tubes（可從BD獲得，目錄號762165）和用于基于硅膠膜的RNA分離和純化的PAXgene Blood RNA Kit組成。 可以使用微量離心機手動進行純化，或在QIAcube上自動進行純化。該系統已獲得FDA營銷許可，并提供體外診斷用途的精確性能規格。

一、性能

      PAXgene Blood RNA Tubes用于收集全血并在18-25°C下穩定細胞內RNA長達3天（或在2-8°C下多5天）。目前可獲得的數據顯示細胞RNA在-20°C或-70°C下穩定至少60個月。

      使用PAXgene Blood RNA System純化的總RNA是高純度的，A ₂₆₀ / A ₂₈₀值在1.8和2.2之間且≤1.0％（w / w）基因組DNA。當使用多達30％的洗脫液時，至少95％的樣品在RT-PCR中沒有顯示出抑制作用。

      用PAXgene Blood RNA System和自動化方案純化的RNA是高純度的，如缺乏RT-PCR抑制（見上文）和A ₂₆₀ / A ₂₈₀值在1.8和2.2之間所示。通過β-肌動蛋白基因序列的定量實時PCR測量，基因組DNA以≤1％（w / w）存在于≥95％的所有樣品中。

     使用PAXgene Blood RNA系統進行RNA純化的自動化方案提供了高度可重復和可重復的RT-PCR結果，使其對臨床診斷測試具有高度可靠性。

二、原理

      PAXgene Blood RNA Kit用于從PAXgene Blood RNA Tube中收集的2.5 ml人全血中純化總RNA。該過程很簡單，可以使用手動或自動程序進行。

      PAXgene Blood RNA Tubes含有基于RNA穩定技術的試劑組合物（美國6,602,718和6,617,170）。該試劑組合物保護RNA分子免受RNase的降解，并使基因表達的離體變化小化。PAXgene Blood RNA Tubes用于收集全血并在18-25°C下穩定細胞內RNA長達3天或在2-8°C下多5天。目前可獲得的數據顯示細胞RNA在-20℃或-70℃下穩定至少60個月。

三、程序

      PAXgene Blood RNA程序很簡單，可以使用手動或自動程序進行

1、手動PAXgene血液RNA程序

      純化開始于離心步驟以在PAXgene Blood RNA Tube中沉淀核酸。將沉淀洗滌并重懸浮，并在優化的緩沖液中與蛋白酶K一起孵育以產生蛋白質消化。通過PAXgene Shredder旋轉柱進行另外的離心以使細胞裂解物均質化并除去殘留的細胞碎片，并將流出級分的上清液轉移到新的微量離心管中。加入乙醇以調節結合條件，并將裂解物應用于PAXgene RNA旋轉柱。在短暫離心期間，當污染物通過時，RNA選擇性地結合到PAXgene二氧化硅膜上。在幾個有效的洗滌步驟中除去剩余的污染物。在*和第二洗滌步驟之間，用DNase I處理膜以除去痕量的結合DNA。洗滌步驟后，將RNA在洗脫緩沖液中洗脫并加熱變性。 

2、自動化PAXgene血液RNA程序

      在QIAcube上自動化的樣品制備遵循與手動程序相同的步驟，使您能夠繼續使用PAXgene Blood RNA Kit純化高質量RNA。

      自動RNA純化方案由2部分（或方案），“PAXgene Blood RNA Part A”和“PAXgene Blood RNA Part B”組成，兩部分之間有簡短的人工干預。

      將離心，洗滌和重懸的核酸沉淀從PAXgene Blood RNA Tube轉移到處理管中，將其置于QIAcube工作臺上的熱振蕩器單元中。操作員從菜單中選擇并啟動“PAXgene Blood RNA Part A”協議。QIAcube執行協議的步驟，直至在洗脫緩沖液中洗脫RNA。操作人員將含有純化RNA的微量離心管轉移到QIAcube的熱水瓶單元中。操作員從菜單中選擇并啟動“PAXgene Blood RNA Part B”協議，并通過QIAcube進行熱變性。

      平均樣品制備時間（基于來自12個樣品制備的數據）為125分鐘，僅有約20分鐘的實際操作時間。

四、應用

      當該試劑盒與PAXgene Blood RNA Tubes一起使用時，該系統提供來自全血的細胞內RNA用于分子診斷測試中使用的RT-PCR。

PAXgene Blood RNA Kit產品詳細信息

50個PAXgene旋轉柱，50個PAXgene粉碎機旋轉柱，加工管，無RNase DNase I，無RNase試劑和緩沖液。與PAXgene Blood RNA Tubes配合使用

  品牌                           貨號                                       名稱                                     

Qiagen                       762164                      PAXgene Blood RNA Kit       

 BD                             762165                      PAXgene Blood RNA Tube 

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